Fetal rhd genotyping from maternal plasma in a population with a highly diverse ethnic background

OBJETIVO: Avaliar o desempenho da reação em cadeia da polimerase (PCR) em gel (convencional) como método diagnóstico não-invasivo para a genotipagem RHD fetal, por meio da análise do plasma materno. MÉTODOS: Foi conduzido um estudo de validação de teste diagnóstico a partir de 81 amostras sangüíneas obtidas de gestantes brasileiras RhD-negativo, entre 4 e 41 semanas de gestação. As regiões exon 10 e intron 4 do gene RHD foram testadas por meio da reação em cadeia da polimerase alelo-específica (AS-PCR) convencional. Os resultados da genotipagem fetal foram comparados com a tipagem sangüínea convencional no período neonatal. RESULTADOS: Quinze amostras foram obtidas no primeiro trimestre, 37 no segundo trimestre e 29 no terceiro trimestre. Houve falha de amplificação em 6 amostras. A concordância entre os resultados da genotipagem e da tipagem neonatal foi de 97,3%, sensibilidade de 98,3% e especificidade de 93,8%.CONCLUSÃO: AS-PCR convencional é um método com bom desempenho para a genotipagem RHD fetal por meio da análise do plasma materno, mesmo em uma população com alto grau de miscigenação.

Blood group genotyping / Genotipagem de grupos sangüíneos

Os antígenos eritrocitários são herdados geneticamente e definidos por seqüências de aminoácidos específicos constituindo uma proteína ou por carboidratos ligados a estas proteínas ou à lipídios. A diversidade dos antígenos de grupos sangüíneos, como para qualquer outro traço biológico, encontra-se ao nível do gene. Existem atualmente mais de 250 antígenos eritrocitários que se encontram distribuídos em 29 sistemas de grupos sangüíneos, de acordo com a Nomenclatura da Sociedade Internacional de Transfusão Sangüínea (ISBT). Os genes que codificam 28 dos 29 sistemas de grupos sangüíneos já foram clonados e seqüenciados. Assim, os problemas que ainda não são resolvidos por testes sorológicos podem ser agora solucionados por técnicas moleculares. O objetivo desta revisão é apresentar os mecanismos moleculares responsáveis pelo aparecimento dos antígenos associados aos fenótipos de grupos sangüíneos; mostrar a aplicação da técnica de PCR na medicina transfusional e materno-fetal, e discutir os problemas clínicos que potencialmente podem ser resolvidos pelas técnicas moleculares. A possibilidade de realizar genotipagem de grupos sanguíneos em conjunto com hemaglutinação muda a gama de possibilidades nos procedimentos transfusionais aumentando assim a segurança dos pacientes transfundidos. No entanto, é importante lembrar que a detecção de um gene através das técnicas de genotipagem molecular não significa necessariamente que a proteína carreando o antígeno será expressa. Assim, resultados falso-negativos e falso-positivos podem ocorrer. Embora seja pouco provável que a genotipagem molecular venha a substituir a hemaglutinação nos próximos anos, estas técnicas utilizadas em conjunto têm um valor potencial importante na segurança transfusional e materno-fetal.

Genotyping of Kell, Duffy, kidd and RHD in patients with B Thalassemia

A determinaçäo dos fenótipos Rh, Kell, Duffy e Kidd, associada ao ABO é utilizada para prevenir a aloimunizaçäo a antígenos eritrocitários e participam também no processo de identificaçäo de anticorpos nos pacientes com B talassemia. Todavia, a fenotipagem desses pacientes é trabalhosa e de difícil interpretaçäo. Nesta situaçäo, deve ser avaliada uma alternativa ao teste de hemaglutinaçäo para determinar o padräo antigênico dos pacientes. Utilizamos para tal fim o método PCR-RFLP. Foram preparados DNAs de 50 pacientes com Btalassemia que haviam sido anteriormente fenotipados pela hamglutinaçäo e testados para Kell, Kidd, Duffy/GATA mutaçäo por PCR-RFLP. RHD/näo-D foi analisado pelo tamanho do produto, do PCR associado à seqüência do gene RHD no intron 4 e exon 10/3' UTR. Os testes de genotipagem foram realizados sem o conhecimento dos resultados dos fenótipos. Para os RHD/näo-D, 47 foram RHD+ e RHD+/RHCE+, e 3 foram RHD- e RHD-/RHCE+. Para o Kell, 48 kk foram K2K2 e 2 Kk foram K1K2. Para o Duffy, das 44 amostras que haviam sido normais, GATA box, 8 Fy(a+b-)foram FYA/FYA, 15Fy(a+b-) foram FYB/FYB; e 19 Fy(a+b+) foram FYA/FYB; das outras 4 amostras, 3 foram FYA/FYB; homozigoto GATA mutaçäo. Duas amostras fenotipadas como Fy(a+b-), que eram normais GATA, apresentavam as mutaçöes 265T/298a e 2 amostras fenotipadas como Fy(a+b+) haviam sido genotipadas como FYA/FYB. Para o Kidd, 15Jk(a+b+) foram JKA/JKA, 12jk(aa-b+) foram JKB/JKB, e 20 jk(a+b+) haviam sido genotipadas como JKB/JKB. A genotipagem é mais acurada que a fenotipagem para determinaçäo de grupos sangüíneos em pacientes portadores de B talassemia poli transfundidos. A genotipagem nesses pacientes pode ser importante para selecionar hemácias antigenicamente negativas para transfusäo de glóbulos vermelhos.

Prevalence of HIV and Treponema pallidum infections in pregnant women in Campinas and their association with socio-demographic factors

The anonymous seroprevalence of HIV and syphilis was studied by collecting umbilical cord blood samples from 5,815 women who gave birth in Campinas'hospitals throughout a six-month period. ELISA and Western blot were used for HIV, and VDRL and TPHA for Treponema pallidum screening. While maintaining the anonymity of the women, information was recorded on the hospital of origin, divided into university (public) and private hospitals, as well as on the form of payment (social security, private insurance or direct payment), age, marital status, education, employment and place of residence. Seroprevalence was 0.42 percent for HIV and 1.16 percent for syphilis. There was a significant correlation between a positive reaction to the two infections (p=0.02). After univariate and logistic regression analysis, only university hospitals were shown to be associated with seropositivity for HIV, whereas the same variable and an older age were associated with syphilis. All positive reactions were found either in public hospitals or among social security patients treated at private institutions. The conclusion was that HIV infection is becoming almost as prevalent as syphilis among this population, and affects primarily the lower socio-economic strata. This suggests that routine, voluntary HIV serology should be considered and discussed with patients during prenatal or delivery care whenever a population shows a seroprevalence close to or greater than 1 percent.

Complexo HLA e glaucoma crônico simples / HLA complex and chronic simplex glaucoma

Antígenos HLA-A e B foram determinados em 23 pacientes caucasóides portadores de glaucoma crônico simples. As freqüências antigênicas observadas foram comparadas às obtidas em amostras de populaçäo caucasóide de Säo Paulo. Os resultados obtidos näo revelaram associaçäo com nenhum antígeno HLA-A ou B isoladamente, porém sugeriram associaçäo com os haplotipos HLA-A9B12, A2B40 e A1B8. Estudo de distribuiçäo de haplotipos HLA entre irmäos portadores de glaucoma crônica simples ou de somente pressäo intraocular elevada revelou excesso de haplotipos em comum, sugerindo a presença no complexo HLA, ou próximo ao mesmo, de genes de susceptibilidade a glaucoma crônico simples

Antitrombina III em doentes com trombose venosa profunda / Antithrombim III in patients with deep thrombophlebitis

Com a finalidade de verificar a freqüência de deficiência de antitrombina III (ATIII) em doentes portadores de trombose venosa profunda (TVP) em nosso meio, a atividade dessa proteína anticoagulante plasmática foi medida por método funcional em 97 pacientes com TVP diagnosticada por flebografia. Essa medida foi realizada na vigência de tratamento com Warfarin Sódico em 41 pacientes, 2 a 3 meses após a suspensäo desse tratamento em 30 doentes e antes e após o tratamento com 26 doentes. Essa dosagem foi também realizada em familiares de pacientes que apresentavam deficiência de ATIII e, como controle, em 60 voluntários clinicamente sadios. A média da atividade da ATIII nos voluntários normais foi de 99,3 ñ 15,0%. Na vigência do tratamento anticoagulante, essa média foi de 100,8 ñ 17,4% e após o tratamento de 89,5 ñ 19,8%. A média verificada nos pacientes, após o término do tratamento, foi significantemente menor que a média na vigência do tratamento e do que a média dos controles normais. Três pacientes na vigência do tratamento e oito, após a suspensäo do mesmo, apresentaram valores de ATIII menor do que a média dos normais, menos dois desvios-padräo. Os familiares de 3 pacientes com deficiência de ATIII apresentaram valores de ATIII dentor da faixa considerada normal

Antitrombina III em doentes com trombose venosa profunda / antithrombin III in patients with deep vein thrombosis

Com a finalidade de verificar a freqüência de deficiência de antitrombina III (ATIII) em doentes portadores de trombose venosa profunda (TVP) em nosso meio, a atividade dessa proteína anticoagulante plasmática foi medida por método funcional em 97 pacientes com TVP diagnosticada clinicamente e confirmada por flevografia. Essa medida foi realizada na vigência de tratamento com Warfarin Sódico em 41 pacientes, 2 a 3 meses após a suspensäo desse tratamento em 30 doentes e antes e após o tratamento em 26 doentes. Essa dosagem foi tambem realizada em familiares de pacientes que apresentavam deficiência de ATIII e, como controle, em 60 voluntários clinicamente sadios. A média da atividade da ATIII nos voluntários normais foi de 99,3 ñ 15,0%. Na vigência do tratamento anticoagulante essa média foi de 100,8 ñ 17,4% e após o tratamento de 89,8 ñ 19,8%. A média verificada nos pacientes após o término do tratamento foi significantemente menor que a média na vigência do tratamento e do que a média dos controles normais. Três pacientes na vigência do tratamento e oito após a suspensäo do mesmo apresentavam valores de ATIII menores do que a média dos normais menos dois desvios-padräo. Os familiares de 3 pacientes com deficiência de ATIII apresentaram valores de ATIII dentro da faixa considerada normal

Frequency of human leukocyte antigen (HLA) in patients with malaria and in the general population of Humaitá country, Amazonas state, Brazil

Em agosto de 1983 foram observados 85 habitantes do Município de Humaitá, Estado do Amazonas, Brasil, com a finalidade de estudar a prevalência dos antígenos de HLA-A, -B, -C E DR, dentre os quais 38 eram doentes com malária causada pelo Plasmodium falciparum. Todos eles foram examinados para avaliaçäo de esplenomegalia, exame parasitológico de sangue e pesquisa de anticorpos de malária. Foram constituídos três grupos (I) 25 indivíduos nascidos na regiäo Amazônica que nunca tiveram malária; II 38 indivíduos naturais da Amazônia que tinham sido tratados de malária no passado, ou que estavam tendo malária atual, e (III) 22 doentes com malária que contraíram na Amazônia e eram procedentes de outras regiöes do Brasil. Foram colhidas amostras de sangue de cada um deles, separados os linfócitos e os antígenos de HLA foram tipados pelo teste de microlinfocitotoxidade. Houve elevada freqüência de antígenos näo identificados, nos grupos estudados, o que sugere ou a existência de homozigoze, ou fenótipo näo identificado nessa populaçäo. Houve alta freqüência fenotípica de antígeno de A9 (W24) (44,7%) no Grupo II, quando comparado ao Grupo I (32%) ou Grupo III (9%). Os indivíduos do Grupo II mostraram também elevada freqüência do antígeno DR4 (80%) quando comparado ao Grupo I (36,3%) ou Grupo III (16,6%). Essas observaçöes sugerem a possibilidade de suscetibilidade genética à malária entre os nativos da Amazônia e indicam a necessidade da realizaçäo de inquéritos mais extensos sobre a freqüência de antígenos de HLA em habitantes de zona endêmica de malária

Detecçäo de anticorpos anti-HLA por reaçäo de microlinfocitotoxicidade potencializada pela adiçäo de anti-gama globulina humana / Detection of anti-HLA antibodies by reaction of the microlymphocytotoxicity potencialized by adiction of human anti-gamma globulin

No presente trabalho realizamos inicialmente a padronizaçäo da reaçäo de microlinfocitotoxicidade potencializada pela adiçäo de anti-gama globulina humana. Padronizada a técnica, estudamos comparativamente os resultados obtidos em 1248 "cross-matches" realizados pelo método clássico e pelo método da anti-gama globulina. A seguir, realizamos a pesquisa de anticorpos anti-HLA em amostras seriadas de 27 pacientes com insuficiência renal crônica, sem transplante prévio, candidatos a transplante de rim de doador cadáver. Os resultados obtidos nos levaram a concluir que o método da anti-gama globulina humana por nós padronizado mostrou-se ser mais sensível que o método clássico para se detectar sensibilizaçäo aos antígenos do sistema HLA. Além disso, o estudo das amostras colhidas seriadamente de pacientes com insuficiência renal crônica, candidatos a transplante de rim de doador cadáver, sugeree que este método pode ser de grande valia no acompanhamento destes pacientes, podendo influenciar favoravelmente a escolha do doador mais compatível, diminuindo o risco de rejeiçäo por mecanismo humoral